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共聚焦顯微鏡的組成介紹

來源:技術文章    發布時間:2020-04-30    瀏覽:280次
共聚焦顯微鏡也叫激光掃描共聚焦顯微鏡,普遍用於熒光成像和細胞分析,它成像清晰、放大倍數大、分辨率高,是生物醫學領域中強有力的研究工具。共聚焦顯微鏡可以進行細胞形態定位、立體結構重組、動態變化過程等研究,並能提供定量熒光測定、定性圖像分析等研究手段,結合其他相關生物技術,在形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域有廣泛應用。
 
共聚焦顯微鏡主要組成包括:顯微鏡、激光光源、掃描裝置、檢測器、計算機係統(包括數據采集,處理,轉換,應用軟件)、圖像輸出設備、光學裝置和共聚焦係統。
 
1、激光器:隨著激光技術的飛速發展,共聚焦顯微鏡可以根據研究需要選擇不同的激光器、如:R-HeNe(633nm)、ArUV(351、364nm)、HeCd(442nm)、AR(458、477、488、514nm)、ArKr(488、568、647nm)、Kr(568nm)、G-HeNe(543nm)、Diode(405nm)等。
 
2、照明針孔:照明針孔與探測針孔相對於物鏡焦平麵是共軛的。激光經照明針孔形成點光源,相幹性好,頻率、振動方向、相位高度一致。
 
3、光束分離器:從樣晶上反射和散射的光與熒光束混合在一起,所以需要用光束分離器將激發和釋放光束分開。
 
4、物鏡:選大數值孔徑平場複消色差物鏡為好,有利於熒光的采集以獲得更清晰的成像。
 
5、焦平麵:激光點光源照射標本,在焦平麵處聚焦,激發熒光標記的樣本發射熒光,形成焦點光斑。該光斑經過物鏡、光束分離器等一係列裝置的處理,分別在照明針孔及探測器針孔兩處聚焦,共聚焦的含義由此而來。
 
6、探測器針孔:起到空間濾波器的作用。最大限度地阻礙非聚焦平麵散射光和聚焦平麵上非焦點斑以外的散射光,以保證探測器針孔所接受到的熒光信號全部來自於樣品光斑焦點位置,因此樣品上衍射聚集光斑和探測器針孔成像光斑包含相同信息。
 
7、探測器:用光靈敏度極高、響應速度極快的電倍增管(PMT)檢測激發熒光,轉變為電信號傳輸至計算機,從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖像。
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